Ključna razmatranja pri dizajnu za Protokole studije validacije virusnog čišćenja proizvoda za gensku terapiju

Ključna razmatranja pri dizajnu za protokole studije validacije uklanjanja virusa proizvoda genske terapije

Proizvodi genske terapije, kao nova generacija bioloških lijekova, predstavljaju značajne razlike u procjeni virusne sigurnosti u odnosu na tradicionalne rekombinantne proteinske proizvode. Vektori genske terapije (kao što su rekombinantni adeno{1}}asocirani virusi, AAV) su i sami virusnog porijekla. Tokom proizvodnje, jedinstveni rizici kao što su kontaminacija pomoćnim virusom i stvaranje virusa-sposobnih za replikaciju (RCV) predstavljaju posebne izazove za dizajn studija validacije uklanjanja virusa. Na osnovu autoritativnih regulatornih smjernica, uključujući ICH Q5A(R2), NMPA, FDA i EMA, ovaj članak sistematski razmatra ključna razmatranja dizajna za protokole studija validacije uklanjanja virusa za proizvode genske terapije, koji pokrivaju procjenu rizika, odabir virusa indikatora, dizajn{7}}smanjivanja modela, najgori-razmatranje statističkih studija stanja, analize posebnih stanja u slučajevima, analize stanja u posebnom slučaju. Cilj je da se praktičarima u ovoj oblasti pruži naučno utemeljena i regulativa{10}}usklađena tehnička uputstva.

I. Jedinstveni aspekti virusne sigurnosti za proizvode genske terapije

Posljednjih godina, polje genske terapije doživjelo je izuzetan napredak. Od 2025. godine, višestruki proizvodi za gensku terapiju dobili su globalno marketinško odobrenje, pokrivajući terapijska područja uključujući hemofiliju, distrofiju retine i spinalnu mišićnu atrofiju (SMA). Među njima, vektori povezani s rekombinantnim adeno-virusom (rAAV) su najšire korištena platforma za gensku terapiju u kliničkim primjenama. Međutim, procjena virusne sigurnosti za proizvode genske terapije je fundamentalno drugačija od one tradicionalnih rekombinantnih proteinskih proizvoda-sama vektor genske terapije je materijal virusnog porijekla, što nameće potpuno nove zahtjeve za dizajn protokola za validaciju virusnog čišćenja.

Tradicionalni rekombinantni proteinski proizvodi (npr. monoklonska antitijela) se obično proizvode korištenjem dobro-okarakteriziranih ćelijskih linija kao što je CHO, gdje su primarni rizici od virusne kontaminacije endogeni retrovirusi koji se potencijalno skrivaju u ćelijskoj banci (npr. retrovirus glodara-poput retrovirusa glodara-slično česticama koje mogu biti uvedene u CHO ćelije). Nasuprot tome, proizvodi genske terapije uključuju različite ćelijske supstrate uključujući HEK293, HeLa i CHO ćelije. Što je još kritičnije, sam proizvod je virusni vektor i višestruki faktori rizika su prisutni tokom proizvodnje: kontaminacija pomoćnim virusom, stvaranje vektora{9}}kompetentnih za replikaciju (RCV/RCL) i integracija genoma vektora u genom domaćina.

U novembru 2023. godine, Međunarodni savjet za harmonizaciju tehničkih zahtjeva za lijekove za ljudsku upotrebu (ICH) je formalno usvojio Q5A(R2) smjernicu, koja je uvela velika ažuriranja u evaluaciju virusne sigurnosti. Ova ažuriranja uključuju novo dodato poglavlje o kontinuiranoj proizvodnji (poglavlje 7), pojačane zahtjeve za procjenu rizika i konkretnija razmatranja za nove proizvode i proizvodne procese. NMPA je izdao Tehničke smjernice za farmaceutska istraživanja i ocjenu aplikacija za klinička ispitivanja za vektor rekombinantnog adeno-povezanog virusa (rAAV)-bazirane in vivo proizvode za gensku terapiju 2023. godine, nakon čega je 2025. godine uslijedio Common Technical A.V. Vektorski-Proizvodi za gensku terapiju zasnovani na In vivo za aplikacije za licenciranje, od kojih oba postavljaju eksplicitnije tehničke zahtjeve za procjenu virusne sigurnosti proizvoda AAV genske terapije.

Ovaj članak sistematski razmatra ključna razmatranja dizajna za protokole studija validacije klirensa virusa za proizvode genske terapije iz više perspektiva, uključujući regulatornu pozadinu, procjenu rizika, odabir virusa indikatora, dizajn modela za smanjenje{0}}smanjenja, postavljanje uslova najgoreg{1}}uvjeta, studije kinetike inaktivacije, statističku analizu i razmatranja posebnih procesa.

II. Pregled regulatornog okvira i zahtjeva

ICH Q5A(R2)-Međunarodna fondacija za harmonizaciju

ICH Q5A(R2) službeno je usvojen 1. novembra 2023. godine i predstavlja ključni međunarodni vodič za procjenu sigurnosti virusa. U poređenju sa Q5A(R1) objavljenim 1999. godine, značajna ažuriranja u verziji R2 uključuju: novo dodato poglavlje o evaluaciji virusne sigurnosti u kontinuiranoj proizvodnji (poglavlje 7); pojačana uloga procjene rizika kao temelja strategija uklanjanja virusa; uključivanje sekvenciranja sljedeće{10} generacije (NGS) u razmatranje otkrivanja virusa; i eksplicitne zahtjeve za evaluaciju novih proizvoda i proizvodnih procesa. Q5A(R2) su usvojila regulatorna tijela, uključujući FDA, EMA i PMDA, pružajući jedinstven tehnički okvir za validaciju uklanjanja virusa širom svijeta.

NMPA{0}}Kineski regulatorni sistem

Regulatorni okvir NMPA za sigurnost virusa pokriva više nivoa:

Nivo dokumenta	Naziv dokumenta	Godina izdanja
Temeljni dokument	Tehničke smjernice za uklanjanje/inaktivaciju virusa iz krvnih produkata	2002
Temeljni dokument	Opći principi za tehnički pregled procjene virusne sigurnosti biološkog tkiva-proizvoda izvedenih i eukariotskih ćelija-izraženih proizvoda	2005
Smjernice za{0}}specifične proizvode	Tehničke smjernice za farmaceutska istraživanja i procjenu aplikacija za klinička ispitivanja za rekombinantne Adeno-povezane viruse (rAAV) vektorske-bazirane in vivo proizvode genske terapije	2023
Smjernice za{0}}specifične proizvode	Uobičajeni tehnički zahtjevi za farmaceutski kvalitet vektora rekombinantnog adeno-povezanog virusa (rAAV)-baziranih in vivo proizvoda za gensku terapiju za aplikacije za licenciranje	2025
Inovativna smjernica	Tehničke smjernice za platformsku validaciju procesa uklanjanja virusa za klinička ispitivanja primjene terapijskih rekombinantnih proteinskih proizvoda (proba)^a	2024

a: Ova smjernica predstavlja prvi put da je kinesko regulatorno tijelo postavilo sistematske tehničke zahtjeve za validaciju platforme procesa uklanjanja virusa i usklađeno je sa duhom ICH Q5A(R2).

FDA i EMA{0}}SAD i evropski regulatorni zahtjevi

FDA je službeno izdala industrijski vodič zasnovan na ICH Q5A(R2) u januaru 2024. Osim toga, poglavlje Farmakopeje Sjedinjenih Država (USP)<1050.1>pruža dodatne tehničke smjernice o dizajnu, evaluaciji i karakterizaciji postupaka uklanjanja virusa. FDA organizira simpozijum o uklanjanju virusa svake dvije godine; Simpozij 2023. bavio se najnovijim-temama kao što su novi modaliteti, kontinuirana proizvodnja, novi mediji za hromatografiju i adsorptivni filteri. Osnovni dokumenti EMA-e uključuju CPMP/BWP/268/95 (Napomena za smjernice o studijama validacije virusa: Dizajn, doprinos i tumačenje studija koje potvrđuju inaktivaciju i uklanjanje virusa) i EMEA/CHMP/BWP/398498/2005 na Virus Safeide Line o Virus Safeideu Istražni medicinski proizvodi), oba su usklađena sa ICH Q5A(R2).

III. Procjena rizika-Osnova dizajna protokola

Identifikacija izvora virusne kontaminacije

ICH Q5A(R2) naglašava da dizajn validacije virusnog klirensa treba da se zasniva na sveobuhvatnoj proceni rizika. Za proizvode genske terapije, identifikacija izvora virusne kontaminacije treba da obuhvati sljedeće nivoe:

Nivo banke ćelija: Endogeni virusi (npr. retrovirusne čestice) i latentno infektivni virusi koji se potencijalno nalaze u supstratima ćelija za proizvodnju (npr. HEK293, CHO, HeLa). Poznato je da ćelije HEK293 sadrže endogene Ad5 E1 sekvence i približno 900 bp EBV fragmenta, i sposobne su za ekspresiju adenovirusa{10}}kompetentnog za replikaciju; stoga ovom riziku treba obratiti posebnu pažnju u procjeni rizika.

Nivo pomoćnog virusa: Proizvodnja AAV vektora obično koristi metode kao što je trostruka transfekcija korištenjem pomoćnih plazmida, koji nose rizik od generiranja{0}}kompetentnog adenovirusa za replikaciju (RCA). Slično, ćelije za pakovanje koje se koriste u proizvodnji lentivirusnih vektora mogu generirati lentivirus-kompetentan za replikaciju (RCL).

Nivo sirovina: slučajni virusi se mogu unijeti kroz sirovine koje se koriste u proizvodnji, uključujući podloge za ćelijske kulture, hranu i enzime. Ovaj rizik je posebno značajan kada se koriste komponente životinjskog porijekla (npr. fetalni goveđi serum, rastvori za varenje tripsina).

Razlike u riziku: genska terapija naspram tradicionalnih rekombinantnih proteina

Dimenzija rizika	Tradicionalni rekombinantni proteinski proizvodi	Proizvodi za gensku terapiju
Viralni izvor	Endogeni virusi iz banke ćelija; adventivni virusi	Virusi banke ćelija; pomoćni virusi; replikacijski{0}}kompetentni vektori (RCV/RCL); integraciju genoma domaćina
Ćelijski supstrat	CHO, NS0, Sp2/0 i druge dobro{3}}okarakterizirane ćelijske linije	HEK293, HeLa, CHO, itd.; neke ćelijske linije su tumorogenog porijekla
Karakteristike proizvoda	Lijek na bazi proteina{0}}; dobro-definisana struktura	Virusni vektor; predstavlja rizik za biološku sigurnost
Strategija validacije	Više{0}}očišćenje od virusa; naglasak na validaciji koraka procesa	Potrebna RCV/RCL detekcija; validacija i testiranje su neophodni
Validacija platforme	Primjenjivo na uspostavljene procese kao što su S/D, nizak pH, nanofiltracija	Ograničena primjenjivost zbog raznolikosti tipova vektora

Tabela 1. Poređenje sigurnosnih rizika od virusa: proizvodi genske terapije naspram tradicionalnih rekombinantnih proteinskih proizvoda

IV. Strategija odabira virusa indikatora

Opšti principi

Odabir virusa indikatora je centralni element u dizajnu protokola validacije uklanjanja virusa. ICH Q5A(R2) zahtijeva da se odabir virusa indikatora temelji na procjeni rizika i da se uzmu u obzir sljedeći faktori:

Relevantnost virusa za supstrat ćelije proizvodnje (relevantni virus)

Fizičko-hemijska svojstva virusa (sa omotačem/ne-obmotanim, DNK/RNA, raspon veličina)

Otpornost virusa na fizičke/hemijske tretmane

Detektivnost i biološka sigurnost virusa

Za proizvode genske terapije, odabir virusa indikatora mora dodatno uzeti u obzir: ulogu samog virusa vektora kao „relevantnog virusa“; potencijalni rizik od kontaminacije pomoćnim virusom; i zahtjevi za otkrivanje i validaciju za viruse{0}}kompetentne za replikaciju (RCV/RCL).

Preporučena tabla indikatora virusa

Virus	Tip	Koverta	Genom	Veličina (nm)	Obrazloženje odabira / primjena
MVM	Parvovirus	Nema	ssDNA	18–26	Model bez{0}}koverata; najmanja veličina i najveća otpornost; pogodno za validaciju nanofiltracije (općenito nije primjenjivo za rAAV vektorske proizvode)
PPV	Parvovirus	Nema	ssDNA	18–26	Model bez{0}}koverata; najčešće korišteni indikatorski virus za krvne proizvode
Reo-3	Reovirus	Nema	dsRNA	60–80	Model bez{0}}koverata; srednje veličine; visoka fizička stabilnost
PRV	Herpesviridae	Da	dsDNA	150–200	Model sa omotačem; velika veličina; širok raspon domaćina
X{0}}MuLV	Retrovirus	Da	ssRNA	80–110	Model retrovirusa sa omotačem; prikladno za ćelijske supstrate izvedene iz CHO-a
BVDV	Flaviviridae	Da	ssRNA	40–60	Model sa omotačem; koristi se za procjenu metoda hemijske inaktivacije (HCV surogat)
VSV	Rhabdoviridae	Da	ssRNA	70	Model sa omotačem; široka pH tolerancija; pogodno za validaciju niskog-pH inaktivacije

Tabela 2. Preporučeni panel indikatora virusa za validaciju uklanjanja virusa proizvoda genske terapije

Posebna razmatranja za AAV vektorske proizvode

Za rekombinantne AAV vektorske proizvode, NMPA Tehničke smjernice za farmaceutska istraživanja i evaluaciju primjene kliničkih ispitivanja za rAAV vektorske-bazirane in vivo proizvode genske terapije zahtijevaju pažnju na detekciju replikacijske-kompetentne AAV (rcAAV). rcAAV se odnosi na AAV sposoban za autonomnu replikaciju, koja tipično proizlazi iz homologne rekombinacije između pomoćnog plazmida i genoma produkta AAV. Detekcija rcAAV se generalno izvodi pomoću infektivnih testova ili qPCR metoda, koje se sprovode odvojeno na lekovitu supstancu i prečišćeni proizvod.

Vrijedi napomenuti da nizvodni procesi prečišćavanja za AAV vektorske proizvode tipično uključuju digestiju nukleazom, hromatografiju (AEX), nanofiltraciju i hromatografiju ionske izmjene (CEX/IEX). U tradicionalnoj validaciji uklanjanja virusa, ovi koraci procesa mogu dovesti do značajnih gubitaka samog AAV vektora; stoga, interakcija između virusa vektora i virusa indikatora mora se pažljivo razmotriti tokom dizajna-smanjenog modela. Za određene korake procesa (npr. nanofiltracija) gdje su gubici AAV vektora značajni, treba procijeniti da li su prilagođavanja procesa opravdana na osnovu podataka o validaciji (npr. podešavanje veličine pora nanofiltracione membrane).

V. Smanjenje{1}}Dizajn i kvalifikacija modela

Opšti principi

Smanjeni{0}}model (SDM) je osnovni alat za validaciju uklanjanja virusa; njegov dizajn mora tačno predstavljati učinak uklanjanja virusa u proizvodnom procesu. ICH Q5A(R2), odjeljak 6.2.2, izričito zahtijeva da model-smanjenog smanjenja održi konzistentnost s proizvodnim procesom u ključnim parametrima. Za proizvode genske terapije, sljedeća razmatranja su posebno važna u dizajnu SDM:

Reprezentativnost kritičnih parametara procesa

Model smanjenja{0}}treba da bude u skladu sa proizvodnim procesom u sledećim parametrima: hromatografski uslovi (sastav pufera, pH, provodljivost); omjer opterećenja (odnos mase vektor/supernatant proteina); vrijeme kontakta i temperatura; protok/vrijeme zadržavanja; čistoća i sastav proizvoda. Za AAV proizvode, uticaj vektorske distribucije veličine čestica i sadržaja praznog kapsida na performanse nanofiltracije takođe treba posebno da se pozabavi.

Zahtjevi za kvalifikaciju modela

ICH Q5A(R2) zahtijeva adekvatnu kvalifikaciju modela smanjenja-smanjenja, uključujući: poređenje atributa kvaliteta proizvoda (npr. čistoća, obnavljanje, gustina); kvalifikacija konzistentnosti kritičnih parametara procesa; i osiguravanje da model-smanjenja bilježi varijabilnost procesa proizvodnje. Za korake hromatografije, konzistentnost profila pikova, eluiranja i ispiranja treba da bude kvalifikovana; za korake nanofiltracije, efekte zapreminskog kapaciteta i sastava proizvoda treba provjeriti.

VI. Najgore-Postavljanje uslova

Postavljanje najgorih{0}}uvjeta je kritičan element u dizajnu protokola za validaciju uklanjanja virusa. Osnovni princip je: validacija treba da se sprovodi pod uslovima koji su najnepovoljniji za klirens virusa, kako bi se osiguralo da proizvodni proces postiže predviđene performanse uklanjanja virusa u celom normalnom radnom opsegu.

Korak procesa	Kritični parametri procesa	{0}}Principi postavljanja najgoreg slučaja
S/D deaktivacija	Koncentracija rastvarača/deterdženta, temperatura, vrijeme kontakta	Koristite niže-granične koncentracije i temperaturu, minimalno vrijeme kontakta, maksimalnu koncentraciju proteina
Nizak{0}}pH inaktivacija	pH, vrijeme kontakta, temperatura, puferski sistem	Koristite najviši dozvoljeni pH, minimalno vreme kontakta, pufer sa najnižim pH puferskim kapacitetom
Nanofiltracija	Tip filtera, zapreminski kapacitet, pritisak filtracije	Koristite maksimalni specificirani kapacitet zapremine; najviši/najniži pritisak filtracije (podaci ukazuju na rizik od prodora virusa pod niskim pritiskom); uzorak najvećeg viskoziteta
hromatografija	Kapacitet opterećenja, pH, provodljivost, vrijeme zadržavanja	Koristite maksimalan kapacitet opterećenja; Kombinacija pH/provodljivost najnepovoljnija za klirens virusa

Tabela 3. Ključna razmatranja za najgori-Postavljanje uslova za svaki korak procesa

Tehničke smjernice NMPA za validaciju platforme procesa uklanjanja virusa za kliničke pokusne primjene terapijskih rekombinantnih proteinskih proizvoda (ispitivanje) eksplicitno navode važne procesne parametre za validaciju platforme u Tabeli 1, uključujući tip i koncentraciju rastvarača/deterdženta, vrijeme inkubacije, temperaturu, zapreminski kapacitet pufera i pritisak. Ovo pruža sistematsku tehničku referencu za postavljanje uslova u najgorem- slučaju.

VII. Studije kinetike inaktivacije

Studije kinetike inaktivacije su važno sredstvo za procjenu efikasnosti koraka procesa inaktivacije. Tehničke smjernice NMPA za uklanjanje/inaktivaciju virusa iz krvnih produkata izričito zahtijevaju da "treba istražiti kinetiku inaktivacije virusa, uključujući stopu virusne inaktivacije i krivulju inaktivacije." Studije kinetike inaktivacije obično koriste pristup uzorkovanja u više-vremenskih-tačaka, u kojem se uzorci prikupljaju u različitim vremenskim tačkama tokom procesa inaktivacije, mjere se titri zaostalih virusa i crtaju krive inaktivacije.

Nizak{0}}pH inaktivacija je jedna od najčešće korištenih metoda inaktivacije za proizvode genske terapije. Tipični niski-pH uslovi inaktivacije kreću se od pH 3,5 do 3,8, sa vremenom inkubacije od 30 do 120 minuta. Krive kinetike inaktivacije obično pokazuju obrazac "brze početne faze praćene sporom terminalnom fazom", tj. početna brzina reakcije je brza i kasnije se usporava. Ako se stopa virusne inaktivacije primjetno smanji s vremenom, to može ukazivati na to da je metoda neučinkovita ili da je virus rezidualnog indikatora razvio otpornost na metodu inaktivacije.

Tipični uslovi za S/D inaktivaciju su 0,3% TNBP + 1% Tween 80, inkubiran na 24 stepena najmanje 6 sati, ili 0,3% TNBP + 1% Triton X-100, inkubiran na 24 stepena najmanje 4 sata. S/D inaktivacija je efikasna samo protiv virusa sa omotačem i nije efikasna protiv virusa bez ovojnice (npr. MVM, PPV). U uzvodnim procesima prečišćavanja za proizvode genske terapije, primena S/D inaktivacije je ograničena njenim potencijalnim uticajem na aktivnost vektora, i generalno se ne koristi kao primarni metod virusne inaktivacije; umjesto toga, primjenjuje se za inaktivaciju virusa u drugim međuprocesima.

VIII. Statistička analiza i izračunavanje LRV

LRV formula za izračun

Vrijednost log smanjenja (LRV) je osnovna metrika za mjerenje efikasnosti uklanjanja virusa. ICH Q5A(R2), odeljak 6.5, daje detaljan opis metoda izračunavanja LRV i statističkog tretmana. Osnovna formula za izračunavanje LRV je: LRV=log₁₀(N₀/N), gdje je N₀ početni titar virusa nakon širenja virusa, a N je preostali titar virusa nakon tretmana. Kada rezidualni titar virusa padne ispod granice detekcije testa, treba koristiti metode procjene kao što je Poissonova distribucija (npr. testiranje velikog-obima).

Primjena intervala pouzdanosti

I ICH Q5A(R2) i EMA CPMP/BWP/268/95 zahtijevaju procjenu intervala pouzdanosti rezultata izračunavanja LRV. Obično se primjenjuje interval pouzdanosti od 95%.

Kriterijumi efektivnosti

Prema NMPA tehničkim smjernicama za uklanjanje/inaktivaciju virusa iz krvnih produkata, smanjenje virusa veće od ili jednako 4 log ukazuje da je korak procesa efikasan za uklanjanje/inaktivaciju virusa. Međutim, ovaj kriterij nije apsolutni prag i treba ga ocijeniti na holistički način zajedno sa krivuljama kinetike inaktivacije, naučnim obrazloženjem za odabir virusa indikatora i ukupnom ispravnošću dizajna protokola za validaciju. Za proizvode genske terapije, posebnu pažnju treba posvetiti kumulativnom kapacitetu čišćenja u svim koracima procesa kako bi se osiguralo da je ukupni profil sigurnosti virusa na prihvatljivom nivou.

IX. Posebna razmatranja procesa za proizvode genske terapije

Primjena i izazovi nanofiltracije

Filtracija{0}}zadržavanja virusa (nanofiltracija) je kritičan korak uklanjanja virusa u daljem prečišćavanju proizvoda genske terapije. Tipični filteri za zadržavanje-virusa imaju veličinu pora od približno 20 nm. Mehanizam uklanjanja virusa nanofiltracije prvenstveno se zasniva na isključenju na osnovu veličine- i može efikasno ukloniti većinu virusa koji su veći od veličine pore na membrani, uključujući male parvoviruse bez -ne omotača kao što su MVM i PPV.

Međutim, nanofiltracija za proizvode genske terapije suočava se sa jedinstvenim izazovima: veličina AAV vektora (otprilike 20–26 nm) je slična onoj kod određenih indikatorskih virusa (npr. MVM, 18–26 nm), što može dovesti do smanjenog oporavka vektora; prazni kapsidi mogu uticati na tok filtracije i efikasnost zadržavanja virusa; viskoznost uzorka može značajno porasti s koncentracijom vektora. Stoga, SDM dizajn za validaciju nanofiltracije treba u potpunosti uzeti u obzir efekte distribucije vektorske veličine čestica i sadržaja praznog kapsida na performanse filtracije, te treba razmotriti korištenje nanofiltracijskih membrana s većim veličinama pora prema potrebi.

Procjena uklanjanja virusa u koracima hromatografije

Ionska izmjenjivačka hromatografija (IEX) je ključni korak u procesima prečišćavanja AAV proizvoda, koji obično koristi digestiju nukleazom praćenu hromatografijom za izmjenu anjona (AEX) za hvatanje praznih i neispravnih kapsida, ili hromatografijom izmjenjivanja katjona (CEX) za fino pročišćavanje punih kapsida. Mehanizmi uklanjanja virusa u koracima hromatografije uključuju isključenje veličine, elektrostatičke interakcije, interakcije afiniteta i druge faktore. Diskusije na FDA 2023 simpozijumu o uklanjanju virusa naglasile su da na efikasnost uklanjanja virusa u koracima hromatografije utiče više faktora, uključujući kapacitet opterećenja, pH, provodljivost i ciklus smole; za sveobuhvatnu evaluaciju treba usvojiti višefaktorski ortogonalni pristup dizajnu.

Kontrola virusne sigurnosti u kontinuiranoj proizvodnji

Novo dodato Poglavlje 7 ICH Q5A(R2) postavlja specifične zahtjeve za procjenu virusne sigurnosti u kontinuiranoj proizvodnji. Za proizvode genske terapije, kontinuirana proizvodnja je postala važan pravac razvoja, ali uvodi i nove izazove za sigurnost virusa. Strategije kontrole sigurnosti virusa u kontinuiranoj proizvodnji uključuju:-line filtere za zaštitu od virusa kao kritične mjere suzbijanja; odgovarajući dizajn vremena boravka i tokova procesa; inkorporacija koraka inaktivacije sa definisanim vremenima zadržavanja; i poboljšana primjena procesne analitičke tehnologije (PAT) za praćenje-u realnom vremenu kritičnih parametara procesa.

X. Zaključci i izgledi

Dizajn protokola za validaciju uklanjanja virusa za proizvode genske terapije zahtijeva individualizirane pristupe u okviru ICH Q5A(R2), prilagođene{2}}specifičnim karakteristikama proizvoda i regulatornim zahtjevima. U poređenju sa tradicionalnim rekombinantnim proteinskim proizvodima, procjena virusne sigurnosti za proizvode genske terapije zahtijeva posebnu pažnju na dodatne rizike koji proizlaze iz vektorskih-specifičnih svojstava (RCV/RCL), interakcije između vektora i indikatorskih virusa i utjecaja novih procesa prečišćavanja na klirens virusa.

Gledajući unaprijed, nekoliko smjerova je vrijedno pažnje: proširena primjena validacije platforme, posebno jasan tehnički put koji je predviđen smjernicama za validaciju platforme koje je izdao NMPA; primjena sekvencioniranja sljedeće-generacije (NGS) u otkrivanju virusa, što će povećati širinu i osjetljivost otkrivanja virusa; kontinuirano usavršavanje strategija kontrole sigurnosti virusa u kontinuiranoj proizvodnji kako napreduje razvoj procesa; i učinak uklanjanja virusa novih medija za hromatografiju i adsorptivnih filtera, koji će pružiti dodatne tehničke mogućnosti za proizvode genske terapije.

Reference

ICH Q5A(R2). Procjena virusne sigurnosti biotehnoloških proizvoda dobivenih iz ćelijskih linija ljudskog ili životinjskog porijekla. Usvojeno 21. novembra 2023.
NMPA. Tehničke smjernice za farmaceutsko istraživanje i ocjenu aplikacija za klinička ispitivanja za vektor rekombinantnog adeno-povezanog virusa (rAAV)-Proizvode za gensku terapiju zasnovanu na in vivo. 2023.
NMPA. Uobičajeni tehnički zahtjevi za farmaceutski kvalitet vektora rekombinantnog adeno-povezanog virusa (rAAV)-proizvoda za gensku terapiju zasnovanu na in vivo za aplikacije za odobrenje marketinga. 2025.
NMPA. Tehničke smjernice za platformsku validaciju procesa uklanjanja virusa za primjenu terapijskih rekombinantnih proteinskih proizvoda u kliničkim ispitivanjima (ispitivanje). februar 2024.
NMPA. Tehničke smjernice za uklanjanje/inaktivaciju virusa iz krvnih produkata. Guoyao Jian Zhu [2002] No. 160. 2002.
NMPA. Opći principi za tehnički pregled procjene virusne sigurnosti biološkog tkiva-proizvoda izvedenih i eukariotskih ćelija-izraženih proizvoda. 2005.
EMA. CPMP/BWP/268/95. Napomena za smjernice o studijama validacije virusa: Dizajn, doprinos i tumačenje studija koje potvrđuju inaktivaciju i uklanjanje virusa. Usvojen 14. februara 1996. godine.
EMA. EMEA/CHMP/BWP/398498/2005. Smjernica za procjenu sigurnosti biotehnoloških medicinskih proizvoda od virusa. jul 2008.
SZO. Smjernice za inaktivaciju virusa i postupke uklanjanja namijenjene osiguravanju virusne sigurnosti proizvoda iz ljudske krvne plazme. WHO TRS 924, Aneks 4. 2004.
Roush D, Bolton G. Proceedings of the Viral Clearance Symposium 2023. PDA J Pharm Sci Technol, 2024, 78(2): 131–155.
USP.<1050.1>Dizajn, evaluacija i karakterizacija postupaka uklanjanja virusa.
NMPA. Ključna razmatranja za studije kontrole kvaliteta proizvoda genske terapije. 2023.